棉藍(lán)乳酚油染色液使用方法：
下面的提作步張為1.5mL料離心管中進(jìn)行的量提取。如果樣品用量垢加,需要使用大的離心管,提取試
劑的用量也需要按比例加。
1.65℃預(yù)熱溶液A,待其沉淀溶化后,充分混勻,然后取0.5mL加入到1.5mL料心管中并放置65℃待
用。最好使用據(jù)蓋離心
2.取0.1-0.39的新鮮或令凍的動(dòng)物美便,加入到預(yù)熱溶液A的高心管中,震器上周震高5-10分鐘。注意
一定要讓管底的品充分震起來。
3.將離心管置于65水浴中保溫至少5分鐘
4.13000-15000室溫高心3分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一新的1.5mL料高心管中
5.在上清液中加入等體積的溶液日,上下郎30秒使之充分混勻,溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。
6.將離心管冰浴至少5分鐘
7.13000-15000g室溫高心3分鐘,轉(zhuǎn)移上清到新的1.5mL料離心管中
8.加加入0.2mL的方(自),震蒸器上充分振蕩30秒混勻:注意一定要讓管底的溶液震蕩起來
9.13000-15000室溫離心3分鐘,小心轉(zhuǎn)移上到新的1.5mL料離心管中
10.重寫第8步和等9步一次。
11.將上清轉(zhuǎn)移到新的1.5mL離心管時(shí),不要超過0.5mL,否則沒有空間加兩倍體積的乙醇。如果有多余的可以
棄之不用
加ロ入2倍體積的乙醇自音),上下頭倒30秒混勻,150009離心5-10分鐘,棄上清,管底將有微小DNA沉淀
注意:最好不要用異內(nèi)醇代替乙醇,否則不容易去除市色素的雜質(zhì)
13.加入1mL75%乙醇自備),震高數(shù)秒,13000150009?溫離心3分鐘,棄上清
14.重復(fù)上步清洗一次。注意:75%乙醇洗兩次有助于去除PCR抑制物。
15.短哲離心,吸棄殘留的75%乙醇(約50uL),室溫球干。注意:一定要去除殘留的75%乙醇,否則會(huì)影后續(xù)
反應(yīng)和電泳上樣(樣品會(huì)飄走
16.加加入30uTE)中液溶解沉淀。注意:不知運(yùn)樣品DNA產(chǎn)本前最好不要加過多TE。如果DNA濃度高,可以再
17.DNA即可用于電泳、酶切和PCR等反應(yīng)。最好用原液和釋液對(duì)照做PCR,最好按PCR終體積的1/10加
入隨的PCR抑制物清除劑BTN60804)。