技術(shù)文獻(xiàn)
技術(shù)文獻(xiàn)
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)elisa試劑盒
人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒
人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)elisa試劑盒
人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)elisa試劑盒
人干細(xì)胞因子受體(SCFR)elisa試劑盒
人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子(SCF/MGF)elisa試劑盒
人可溶性CD40配體(sCD40L)elisa試劑盒
人可溶性CD30配體(sCD30L)elisa試劑盒
人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)elisa試劑盒
人P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)elisa試劑盒
人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)elisa試劑盒
人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)elisa試劑盒
人神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)elisa試劑盒
人神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)elisa試劑盒
人的神經(jīng)生長因子(NGF)elisa試劑盒
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa試劑盒
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)elisa試劑盒
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)elisa試劑盒
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)elisa試劑盒
人巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa試劑盒
人巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa試劑盒
人巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)elisa試劑盒
人單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)elisa試劑盒
人單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)elisa試劑盒
人單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)elisa試劑盒
人L選擇素(L-Selectin/CD62L)elisa試劑盒
人白介素9(IL-9)elisa試劑盒