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定量PCR試劑盒

鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

文字:[大][中][小] 2024-3-12    瀏覽次數(shù):204    

產(chǎn)品描述:

產(chǎn)品名稱 鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱 Abalone Herpes-like Virus(AbHV)
貨號 HE33561-R

自備物品:

15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器

比色皿:用于比色的容器

96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器

分光光度儀:用于比色分析

酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析

儲存條件:

14℃或-20℃

準(zhǔn)備物品

清理液(A)                                   毫升

染色液(t B)                                   微升

稀釋液(C)                                   毫升

溶解液(tD)                                   毫升

產(chǎn)品說明書                                   1份

特點:

1. 一管式操作,用戶只需要提供樣品即可。

2. 根據(jù)大豆熱休克蛋白基因保守區(qū)域設(shè)計引物,能專一性檢測出樣品中的大豆成分,但不能檢測其他非大豆成分。

3. 快速,整個檢測過程(按一個樣品計)所需時間僅為 2.0 小時。

4. 只需要普通 PCR 儀和凝膠電泳儀,無需配置貴重儀器設(shè)備。

5. 對混合樣品中大豆成分的檢測下限為 0.1%,對樣品中大豆成分的核酸檢測下限為 1.0ng/μL。

6. 本只能用于科研,足夠 50 次 40uL 體系的常規(guī) PCR。

實驗注意事項:


1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;

2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;

3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。

主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

實驗方法步驟:
鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。



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